P-gp, BSEP, BCRP, MRP1–MRP8 und Kontrollvesikel für Effluxtransporter-Assays nach ICH M12, FDA und EMA. Aus humanen HEK293-Zellen — nicht aus Sf9-Insektenzellen. Ab Schweizer Lager, Fakturierung in CHF.
ABC-Transporter vermitteln den Efflux von Wirkstoffen und Metaboliten über Zellmembranen — ihre Inhibition ist mechanistisch mit DILI und klinisch relevanten DDIs verknüpft.
FDA, EMA und ICH M12 empfehlen Transporter-Inhibitionstesting als Teil der Standard-DMPK-Charakterisierung. P-gp und BCRP sind Pflichttransporter für die DDI-Bewertung, BSEP ist der zentrale Transporter für das DILI-Risikoprofil. Da die Inhibition mehrerer Transporter das DILI-Risiko kumulieren kann — z.B. BSEP-Inhibition gemeinsam mit MRP2, MRP3 oder MRP4, was die kompensatorischen Gallensäure-Effluxwege in Hepatozyten beeinträchtigt — liefert ein vollständiges Panel typischerweise ein vollständigeres Risikobild als die isolierte BSEP-Testung.
Jedes Kit wird gegen ein validiertes Probesubstrat mit einer festgelegten Mindest-ATP/AMP-Ratio freigegeben.
Die ATP/AMP-Ratio ist das praktische Qualitätsmass für einen Vesikulären Transportassay. Sie drückt aus, wie viel der gemessenen Akkumulation echter ATP-abhängiger Transport ist — im Gegensatz zu passiver Aufnahme und unspezifischer Bindung. Eine niedrige Ratio komprimiert das Assay-Fenster und erhöht die IC50-Variabilität.
| Transporter | Probesubstrat | ATP/AMP-Ratio | Regulatorische Relevanz |
|---|---|---|---|
| P-gp (MDR1, ABCB1) | Convallatoxin | > 5 | DDI Pflicht (FDA/EMA/ICH M12) |
| BSEP (ABCB11) | Taurocholat (TCA) | > 10 | DILI-Risikobewertung |
| BCRP (ABCG2) | Estron-3-Sulfat (E1S) | > 10 | DDI Pflicht (FDA/EMA/ICH M12) |
| MRP1 (ABCC1) | Estradiol-17β-Glucuronid | > 5 | Erweiterte Charakterisierung |
| MRP2 (ABCC2) | CDCF | > 20 | DILI-Risiko (kanaliculär) |
| MRP3 (ABCC3) | Estradiol-17β-Glucuronid | > 10 | Kompensatorischer Gallensäure-Efflux |
| MRP4 (ABCC4) | DHEAS | > 5 | Nukleotid- und Gallensäure-Efflux |
| MRP5 (ABCC5) | CDCF | > 3 | Zyklischer Nukleotid-Efflux |
| MRP8 (ABCC11) | DHEAS | > 3 | Spezifische Wirkstoffefflux-Studien |
Kontrollvesikel aus nicht-transfizierten HEK293-Zellen sind separat erhältlich und gehören in jeden Assaylauf — ATP-abhängiger Transport ist definiert als die Differenz zwischen Transporter-Vesikel und Kontrollvesikel.
Einzelkits pro Transporter — wählbar je nach Studienpanel. Mengenangebote und vollständige Panel-Angebote auf Anfrage.
Breast Cancer Resistance Protein — FDA/EMA Kernpanel-Transporter. Für DDI-Bewertung und Substrat-/Inhibitorcharakterisierung.
P-Glykoprotein — der am häufigsten getestete Effluxtransporter. Pflichtbestandteil jedes regulatorischen DDI-Panels.
Bile Salt Export Pump — zentraler Transporter für DILI-Risikobewertung und Cholestase-Mechanismen.
Multidrug Resistance Protein 1 — breites Substratspektrum, Efflux in nicht-hepatischen Geweben.
Hepatischer kanalikuärer Transporter — relevant für BSEP-assoziiertes DILI-Risiko und organische Anionausscheidung.
Basolateraler hepatischer Transporter — kompensatorischer Gallensäure-Efflux bei BSEP-Inhibition.
Nukleotid- und Gallensäure-Effluxtransporter mit breiter Gewebeexpression.
Zyklischer Nukleotid-Effluxtransporter — relevant für Nukleotidanaloga-Studien.
ABCC11-Transporter — für spezifische Wirkstoffefflux-Studien und akademische DMPK-Forschung.
Alle Kits werden ab Lager in der Schweiz geliefert — ohne Einfuhrverzollung, Fakturierung in CHF über die Seamless Bio GmbH, Münchenstein. Für Schweizer CROs, Pharmaunternehmen und Forschungseinrichtungen entfällt damit die Zollabwicklung vollständig.
Jedes Kit wird mit chargenspezifischen Aktivitätsdaten (CoA) geliefert. Auf Anfrage: technische Datenblätter, Validierungsdaten und Assay-Protokolle. Für laufende Screening-Programme empfiehlt sich eine Chargenreservierung.
ICH M12 fasst die bisherigen DDI-Leitlinien von FDA und EMA zusammen. Swissmedic folgt als ICH-Mitglied dieser Leitlinie – ein ICH-M12-konformes In-vitro-Transporterpaket gilt damit für Einreichungen in der Schweiz, der EU und den USA.
| Transporter | Status nach ICH M12 | Format |
|---|---|---|
| P-gp (ABCB1) | Pflicht (Efflux-DDI) | Vesikel oder zellbasiert |
| BCRP (ABCG2) | Pflicht (Efflux-DDI) | Vesikel oder zellbasiert |
| BSEP (ABCB11) | Bei hepatobiliärer Elimination oder DILI-Signal | Vesikel |
| MRP2, MRP3, MRP4 | Kontextabhängig, erweiterte Charakterisierung | Vesikel |
| OAT1, OAT3, OCT2 | Pflicht (renale Aufnahme) | Zellbasiert, z. B. ciPTEC |
Für Inhibitionsstudien hat der Vesikelassay praktische Vorteile: kein Permeabilitätsartefakt, engere IC50-Konfidenzintervalle, leichter zu standardisieren. Ein verbreitetes Modell ist internes Screening mit Kits in der Discovery und eine GLP-Bestätigungsstudie bei einem qualifizierten Labor für die Einreichung.
Welche Transporter sind nach ICH M12, FDA und EMA verpflichtend?
P-gp und BCRP sind die Pflicht-Effluxtransporter für die DDI-Bewertung nach FDA Guidance (2020), EMA DDI Guideline und ICH M12. BSEP wird separat für das Hepatotoxizitätsprofil (DILI-Risiko) bewertet — nicht als DDI-Pflichttransporter, aber regulatorisch erwartet in Substanzen mit hepatischer Ausscheidung oder Gallensäure-Interaktionspotenzial.
Warum HEK293 statt Sf9-Insektenzellen?
ABC-Transporter sind glykosylierte Membranproteine aus Säugerzellen. Das Expressionssystem beeinflusst post-translationale Modifikation (Glykosylierung) und die Membranlipidzusammensetzung — beides hat direkten Einfluss auf Transportkinetik und Substratselektivität. HEK293-Zellen sind humanen Ursprungs und liefern biologisch näher am in-vivo-Kontext liegende Transportdaten als Sf9-Insektenzellen.
Sind die Kits mit allen Detektionsmethoden kompatibel?
Ja — die Kits sind kompatibel mit Radiolabel (³H, ¹⁴C), LC-MS/MS und Fluoreszenz-Ausleseverfahren. Die Wahl der Detektionsmethode hängt vom Substrat, der verfügbaren Infrastruktur und den Anforderungen der regulatorischen Einreichung ab.
Was ist der ATP/AMP-Transport-Ratio und warum ist er wichtig?
Die ATP/AMP-Ratio drückt aus, wie viel der gemessenen vesikulären Akkumulation echter ATP-abhängiger Transport ist — im Vergleich zu passiver Diffusion und unspezifischer Bindung. Eine hohe Ratio bedeutet ein breites Assay-Fenster und niedrige IC50-Variabilität. Eine niedrige Ratio komprimiert das Fenster und kann zu falsch-negativen Inhibitionsdaten führen. Alle Cell4Pharma-Kits werden mit garantierten Mindest-Ratios pro Transporter freigegeben.
Wie lange sind die Kits nach Anlieferung haltbar?
Mindestens 1 Jahr bei −80 °C ab Herstellungsdatum. Die Transportaktivität bleibt stabil nach Lagerung bei −20 °C, nach zwei Tagen bei 4 °C und über fünf Freeze-Thaw-Zyklen. Das exakte Ablaufdatum ist auf dem chargenspezifischen CoA angegeben.
Benötige ich für jeden Assay ein Kontrollvesikel?
Ja. Kontrollvesikel aus nicht-transfizierten HEK293-Zellen sind für jeden Assaylauf erforderlich. ATP-abhängiger Transport wird definiert als die Differenz der Akkumulation zwischen Transporter-Vesikel (ATP-Bedingung) und Kontrollvesikel (AMP-Bedingung) — dieser Vergleich ist die Grundlage für die IC50-Berechnung. Kontrollvesikel sind separat bestellbar.
Kann ich ein Testvial erhalten?
Ja — Testvials sind auf Anfrage erhältlich. Bitte geben Sie bei der Anfrage an, welcher Transporter und welche Detektionsmethode relevant sind, damit wir das passende Kit und Protokoll mitliefern können.
Wie läuft die Lieferung in die Schweiz ab?
Die Kits werden ab unserem Schweizer Lager in Münchenstein versandt — keine Einfuhrverzollung, Fakturierung in CHF. Für dringende Bedarfe sprechen Sie uns direkt an — wir koordinieren den Versand direkt mit Ihrem Empfangslabor.
Wie viele Reaktionen brauche ich für eine IC50-Kurve?
Rund 20–24 Reaktionen pro Transporter (8 Konzentrationen im Duplikat plus Kontrollen). Ein Vial mit 100 Reaktionen reicht für 4–5 vollständige IC50-Bestimmungen.
Kann ich die Kits für GLP-Studien verwenden?
Die Kits sind für internes Screening und explorative DMPK-Studien ausgelegt. GLP-pflichtige Bestätigungsstudien laufen in einem GLP-zertifizierten Labor mit vollständigem Studienbericht – mit demselben Assay-Prinzip.
Nennen Sie uns Ihr Panel und Ihre Detektionsmethode — wir bestätigen Chargenverfügbarkeit ab Schweizer Lager und legen auf Wunsch ein Testvial bei.
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