P-gp (P-Glykoprotein, ABCB1) und BCRP (Breast Cancer Resistance Protein, ABCG2) sind die beiden Pflicht-Effluxtransporter in jedem regulatorischen DDI-Panel nach ICH M12, FDA und EMA. Dieser Beitrag erklärt, wie das Testing korrekt aufgesetzt wird, was bei der Assay-Qualität zu beachten ist und welche Fallstricke Schweizer DMPK-Teams kennen sollten.
Warum P-gp und BCRP regulatorische Pflichtpanel sind
P-gp und BCRP sind die wichtigsten Effluxtransporter im Darm (Absorption), in der Leber (hepatische Clearance), in der Niere (renale Ausscheidung) und in der Blut-Hirn-Schranke. Inhibition beider Transporter kann die systemische Exposition eines Co-Medikaments klinisch relevant erhöhen — das ist die Grundlage für DDIs in der Klinik. ICH M12, FDA DDI Guidance (2020) und EMA DDI Guideline fordern daher in-vitro-Inhibitionsdaten für P-gp und BCRP für jede neue Substanz.
Vesikelassay vs. zellbasierter Assay — was ist für P-gp und BCRP besser?
Beide Formate sind nach ICH M12 akzeptiert. Der Vesikelassay hat für Inhibitionsstudien (IC50-Bestimmung) praktische Vorteile: kein Einfluss der Zellpermeabilität, direktere Messung der Transporter-Inhibition, einfachere Standardisierung. Der bidirektionale Transportassay (zellbasiert, z.B. Caco-2 oder MDCK-MDR1) ist besser geeignet wenn zusätzlich Substratcharakter (Efflux Ratio) bestimmt werden soll.
Assay-Setup: Was für valide IC50-Daten entscheidend ist
1. ATP/AMP-Transportratio
Die Ratio drückt das Verhältnis von aktivem ATP-abhängigem Transport zu passiver Hintergrundakkumulation aus. Für P-gp sollte die Ratio >5 betragen, für BCRP >10. Kits mit niedrigerer Ratio liefern ein komprimiertes Assay-Fenster und schlechtere IC50-Reproduzierbarkeit. Cell4Pharma-Kits garantieren diese Ratios chargenspezifisch.
2. Kontrollvesikel in jedem Assaylauf
Kontrollvesikel aus nicht-transfizierten HEK293-Zellen müssen in jedem Assaylauf mitgeführt werden. Der ATP-abhängige Transport wird als Differenz zwischen Transporter-Vesikel (ATP-Bedingung) und Kontrollvesikel (AMP-Bedingung) berechnet — ohne diese Differenzierung sind die IC50-Daten regulatorisch nicht verwertbar.
3. Probesubstrat-Validierung
Das Probesubstrat muss in jedem Assay mitgeführt werden um die Transporter-Aktivität der Charge zu bestätigen. Für P-gp: Convallatoxin. Für BCRP: Estron-3-Sulfat (E1S).
Typische IC50-Cutoffs und regulatorische Interpretation
ICH M12 gibt keine fixen IC50-Cutoffs vor — die klinische DDI-Relevanz wird durch den Vergleich des IC50 mit der klinisch erwarteten inhibitorischen Konzentration ([I]/IC50 Ratio) bewertet. Als Ausgangspunkt: Wenn [I]₁/IC50 < 0,1 ist ein klinisch relevanter DDI unwahrscheinlich. Wenn [I]₁/IC50 ≥ 0,1, empfiehlt ICH M12 eine vertiefte Beurteilung oder klinische DDI-Studie.
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P-gp- und BCRP-Vesikelkits (Cell4Pharma) ab Schweizer Lager — keine Einfuhr-MWST, Fakturierung in CHF, Versand auf Trockeneis ohne Grenzunterbrechung. Chargenspezifisches CoA mit ATP/AMP-Ratio-Dokumentation inklusive.
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